专家访谈：甲基化检测居然还可以这么简单！

发布时间： 2025-08-01 浏览：

编者按

近日，重庆某三甲医院李教授带领团队对重亚硫酸盐法和酶切法两种甲基化检测技术在操作流程和人工时长等方面做了对比测试，以期在降本增效的前提下，为科室探索出新项目，从而实现科室增收。真是不比不知道，一比吓一跳！对比测试结果真正是让李教授慨叹：甲基化检测居然还可以这么简单！带着这声慨叹，编者小奕也是有幸采访到了李教授，请他为我们讲述甲基化检测究竟是如何简单的。

编者小奕：请您谈谈重亚硫酸盐法和酶切法两种甲基化检测技术在操作流程上有哪些不同？

李教授：做过定量PCR实验的技术人员都知道，基于重亚硫酸盐法的甲基化检测作为甲基化检测的常用技术，其实验流程中需要经过重亚硫酸盐处理和纯化两个步骤。如果没有基于甲基化敏感的限制性内切酶法的甲基化检测新技术，我们都会认为重亚硫酸盐处理和纯化这两个步骤是很正常的，甚至认为这是必须的，这固化了我们的思维，但新技术的出现往往是推动科室发展的动力，尤其在提质降本增效的前提下，在为科室探索新项目实现增收方面可出奇制胜！

我们在充分了解酶切法qPCR技术的实验流程后发现，酶切法qPCR在核酸提取后，免重亚硫酸盐处理，只需将DNA模版加入含有甲基化敏感的限制性内切酶的PCR反应体系中即可，随后直接在PCR仪上进行温育和PCR反应，真正实现了一管法操作！

编者小奕：重亚硫酸盐处理的甲基化检测和基于甲基化敏感的限制性内切酶法（酶切法qPCR）两种技术在实验操作流程上的不同之处会给实验人员和检测结果带来什么影响呢？

李教授：因为重亚硫酸盐处理法qPCR需要经过重亚硫酸盐处理和纯化两个步骤，所以，无形中增加了人工操作的时长。大家都知道，我们医技科室每天都有很多的检测项目要开展，在科室技术人员有限的情况下，工时对我们来说真的是太重要、太紧缺了。我们还发现实验流程中一旦人工操作的时间越长，就越容易出错；再加上重亚硫酸盐处理法qPCR技术本身的缺陷，容易造成转化效率低、稳定性不足，最终导致结果准确性的偏差。

酶切法qPCR在核酸提取后，基本不再需要什么人工操作了，自动化程度高，检测结果可重复性稳定可靠，人员工作效率也显著提高了。由于酶切法qPCR是基于甲基化敏感的限制性内切酶无法切割位点中甲基化修饰序列的原理，无需对序列进行转化，因此，酶切法qPCR对样本起始量要求低，比对效率更高。我认为酶切法qPCR技术可能是未来DNA甲基化检测应用的新方向。

编者小奕：听您的对比分析，我现在特别好奇，特想知道酶切法qPCR与重亚硫酸盐处理法qPCR相比，到底实现了多少收益？节省了多少工时？这些节省出来的工时，如果用来开展新项目，又可以为科室带来多少增收呢？

李教授：我们设置了两组对比测试：甲组为1人1天操作1台qPCR仪，96孔板满负荷检测样本；乙组为1人1天操作1台qPCR仪，检测40例样本。

甲组对比结果发现：重亚硫酸盐处理法qPCR从核酸提取到qPCR反应，需要10.5小时，其中的重亚硫酸盐处理和纯化两个步骤就需要4.5小时；而酶切法qPCR从核酸提取到qPCR反应，仅需4.5小时。按照1天工作八小时计算，重亚硫酸盐处理法qPCR在1天内只能做1个96孔板的样本检测，而且还需要加班2.5小时才能完成；酶切法qPCR在1天内可以做3个96孔板的样本检测，因为节省出来的3.5小时和酶温育的1小时，可以用来做第2个和第3个96孔板的样本核酸提取。这样算下来，酶切法qPCR在1天内可以检测282个样本（不含对照样本）；而重亚硫酸盐处理法qPCR在1天内只能检测94个样本（不含对照样本）。参照重庆甲基化检测物价828元/例估算，酶切法qPCR可在1天内实现超23万的经济收益；而重亚硫酸盐处理法qPCR在1天内只能实现7.8万的收益，其中的收益还要支付2.5小时的工时费。

乙组对比结果发现：重亚硫酸盐处理法qPCR完成40例样本的从核酸提取到qPCR反应，需要7.25小时，其中人工操作时长6.25小时；而酶切法qPCR完成40例样本的从核酸提取到qPCR反应，需要4.17小时，其中人工操作时长2.17小时。两者相比，酶切法qPCR在1天内可以节约4.08小时的人工。如果用这4.08小时开展HPV分型检测（15种），定价300元/例，22个样本/天（不含对照样本），1天增收6600元，1年248个工作日，那么，一年将有164万的增收。

结语：通过本次采访，编者小奕真正听到了来自医技科室专家们的心声，感受到了基于甲基化敏感的限制性内切酶法的甲基化检测（酶切法qPCR）新技术确实更简单、易操作、省人工，最为关键的是可以为医技科室降本增收！当然，小编也从中明白了一个道理：产品要源于需求，要解决实际问题，这样的产品才是好产品！国家药监局批准上海奕谱生物宫奕安 ®PCDHGB7 基因甲基化检测试剂盒三类证（国械注准 20253401308）。该产品为首款免重亚硫酸盐处理、基于甲基化敏感限制性内切酶技术的宫颈癌检测试剂，适用于宫颈癌检测，助力加速迈向宫颈癌消除目标。